Een kiemgetal is het aantal kolonies dat uit een monster van het extract is gegroeid, berekend per gram. “Afwezig” betekent niet aangetroffen in de hoeveelheid die is getest. Beide beschrijven een batch op de dag van de test.
Tegen het einde van de specificatie van een botanisch extract staan de microbiologische rijen: een totaal kiemgetal, het aantal gisten en schimmels, en twee of drie bacteriën die als “afwezig” of “negatief” zijn aangemerkt. Ze zijn kort en worden gemakkelijk overgeslagen. Een extract is gemaakt van een plant, en een reflectiedocument van het comité voor kruidengeneesmiddelen van het Europees Geneesmiddelenbureau gaat van dat feit uit: “Omdat kruidensubstanties van natuurlijke oorsprong zijn, hebben ze over het algemeen een hoger microbieel gehalte dan chemische geneesmiddelsubstanties.”1
Hier volgen zes controles die u uitvoert op deze rijen. Ze steunen op Europese richtsnoeren voor kruidengeneesmiddelen, op het levensmiddelenrecht van de Europese Unie en de Verenigde Staten, en op een gepubliceerd onderzoek naar supplementen. Onze eerdere artikelen behandelden de specificatie, de extractverhouding, het analysecertificaat, het extractiemiddel en de dragerstof, de rijen voor zware metalen en bestrijdingsmiddelen en de bepalingsmethode; dit artikel blijft bij de micro-organismen.
01 / DE RIJEN
Welke organismen noemt de specificatie?
De rijen zijn van twee soorten. Twee ervan zijn kiemgetallen: het totaal aeroob kiemgetal, of TAMC, dat een specificatie kan vermelden onder een naam als totaal kiemgetal, en het totaal aantal gisten en schimmels, of TYMC. De naam alleen zegt niets over de methode, dus vraag welke methode is gebruikt; de zesde controle komt op methoden terug. De overige rijen noemen organismen, waarvan de meeste niet mogen worden aangetroffen in een vermelde hoeveelheid. Het reflectiedocument concludeert dat specificaties voor kruidensubstanties, kruidenpreparaten en kruidengeneesmiddelen “tests moeten omvatten voor TAMC en TYMC en voor de afwezigheid van bepaalde gespecificeerde micro-organismen, tenzij anderszins onderbouwd”.1
De Europese Farmacopee beschrijft tests voor een korte lijst van zulke organismen. Het hoofdstuk voor kruidengeneesmiddelen voor oraal gebruik en de extracten die daarin worden gebruikt (2.6.31) behandelt Escherichia coli, galtolerante gramnegatieve bacteriën en Salmonella; het algemene hoofdstuk over gespecificeerde micro-organismen (2.6.13) voegt daar Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, clostridiën en Candida albicans aan toe.1 De lijst is niet gesloten. Europese richtsnoeren over specificaties zeggen dat de herkomst van de plant in aanmerking moet worden genomen “bij het overwegen van de opname van andere mogelijke pathogenen (bijv. Campylobacter- en Listeria-soorten)”.2
Niet elk genoemd organisme is een kwestie van aanwezig of afwezig. In het onderzoek uit 2019 dat in de volgende controle wordt beschreven, werden “aanwezigheid en aantal” van galtolerante gramnegatieve bacteriën bepaald.3
Controleer: dat de specificatie voor elk van de twee kiemgetallen een limiet geeft en elk van de andere organismen noemt, met een limiet of het woord afwezig, in plaats van één regel met “voldoet”.
02 / HET KIEMGETAL
Wat omvat een kiemgetal in CFU/g?
Een kiemgetal is geen gewicht aan bacteriën. In het hieronder beschreven onderzoek uit 2019 werd bijvoorbeeld elk monster bereid en verdund, gemengd met een kweekmedium en geïncubeerd; de kolonies die groeiden werden geteld, en het resultaat werd berekend als kolonievormende eenheden (kve) per gram, geschreven als CFU/g, of per milliliter voor een vloeistof.3 Een kiemgetal omvat wat onder de omstandigheden van de test groeit: bacteriën en schimmels “die onder aerobe omstandigheden kunnen groeien”.1
Een resultaat boven nul is op zich geen teken van een fout, ook niet bij een extract dat met alcohol is gemaakt. Ethanol werkt op groeiende cellen, maar is “niet effectief tegen bacteriële sporen”, en doordat de test voedingsstoffen en warmte levert, worden sporen van bepaalde bacteriën, meestal aerobe Bacillus-soorten, met de bacteriën meegeteld. Wat na extractie met alcohol overblijft, wordt “voornamelijk vertegenwoordigd door bacteriële endosporen”. Het document voegt eraan toe dat hydroalcoholische extractie met verwarming gewoonlijk producten oplevert met een TAMC onder 10 000 CFU/ml; dat getal geldt voor de vloeistof, en het niveau kan weer stijgen wanneer de alcohol wordt verdampt om een droog extract te maken, zoals de vijfde controle uitlegt.1
Een in 2019 gepubliceerd onderzoek laat zien hoe groot het bereik in de praktijk is. De auteurs analyseerden batchvrijgavetests op 122 monsters van supplementen met plantaardige ingrediënten en tests op 30 monsters van grondstoffen op plantaardige basis. Van alle monsters bevatte 92.1% bacteriën, en sporenvormende Bacillus-soorten werden in bijna alle gevonden. Gemeten aan de limieten die de auteurs hanteerden, 100 000 CFU/g voor het aerobe kiemgetal en 10 000 CFU/g voor gisten en schimmels, overschreden zes monsters van supplementen en twee monsters van grondstoffen de eerste, en vijf monsters van supplementen en zes monsters van grondstoffen de tweede.3
Controleer: de eenheid, CFU/g, en een limiet voor elk van de twee kiemgetallen.
03 / AFWEZIGHEID
Afwezig in hoeveel?
Geen enkele test kan aantonen dat een organisme in een hele batch afwezig is. Een test laat alleen zien dat het organisme niet is aangetroffen in de onderzochte hoeveelheid, dus de rij is pas compleet wanneer ze die hoeveelheid vermeldt. Het levensmiddelenrecht van de Europese Unie neemt de hoeveelheid op in de limiet zelf: voor Salmonella in kant-en-klare gekiemde zaden luidt het criterium “Niet aangetoond in 25 g”, in elk van vijf deelmonsters.4 De definitie van een microbiologisch criterium in die wetgeving heeft dezelfde vorm: zo’n criterium berust op “de af- of aanwezigheid van micro-organismen of het aantal daarvan, en/of de hoeveelheid toxinen/metabolieten ervan, per eenheid van massa, volume of oppervlakte dan wel per partij”.4
De testhoeveelheden verschillen. Het onderzoek uit 2019, waarin methoden van de Europese Farmacopee werden gevolgd, testte op Escherichia coli in 1 g en op Salmonella in 10 g.3 Het levensmiddelencriterium hierboven gebruikt 25 g. Hoe groter de hoeveelheid, hoe veeleisender de test, dus “afwezig in 25 g” en “afwezig in 1 g” zijn verschillende limieten. Een rij die alleen “negatief” zegt, laat niet zien welke is toegepast.
Controleer: voor elk organisme dat als afwezig of negatief is aangemerkt, de hoeveelheid die is getest en het aantal monsters.
04 / DE REFERENTIE
Waar komen de limieten vandaan?
Voor kruidengeneesmiddelen in Europa komen de limieten uit de Europese Farmacopee. Zoals het reflectiedocument het beschrijft, deelt hoofdstuk 5.1.8 kruidengeneesmiddelen in hun eindvorm in drie categorieën in, A, B en C, naargelang de manier waarop ze worden gemaakt en gebruikt. Kruidentheeën, die met kokend water worden bereid, mogen relatief hoge kiemgetallen hebben. Extracten voor oraal gebruik moeten volgens het document aan categorie C voldoen waar is aangetoond dat de verwerking de micro-organismen niet voldoende zou verminderen om de criteria van categorie B te halen.1 Europese richtsnoeren over specificaties vragen dat kruidenpreparaten voor oraal gebruik, waaronder extracten, “in overeenstemming met Ph. Eur. hoofdstuk 5.1.8” zijn.2
Voor het plantaardige materiaal zelf leggen de hoofdstukken van de farmacopee geen limieten vast, merken dezelfde richtsnoeren op. Aanvaardingscriteria “moeten worden vastgesteld”, en de limieten in sectie A van hoofdstuk 5.1.8 “kunnen als aanvaardbaar worden beschouwd voor kruidensubstanties als uitgangsmateriaal”.2
Het levensmiddelenrecht zegt minder. De verordening van de Europese Unie inzake microbiologische criteria stelt haar limieten per levensmiddelencategorie vast, en geen enkele categorie in de bijlage noemt voedingssupplementen, kruiden of botanische extracten. De enige rijen die niet aan één soort levensmiddel zijn gebonden, zijn die voor kant-en-klare levensmiddelen, en daarin staat een criterium voor één enkel organisme, Listeria monocytogenes.4 De auteurs van het onderzoek uit 2019 merken op dat de bijlage supplementen niet als aparte groep aanwijst, voegen eraan toe dat de verantwoordelijkheid voor hun kwaliteit “bij de fabrikanten ligt”, en stellen voor dat de criteria voor supplementen “niet minder dan voor plantaardige geneesmiddelen” moeten zijn.3 In de Verenigde Staten geeft de regel voor voedingssupplementen ook geen getallen: het bedrijf dat het supplement maakt, moet voor elke component “limieten voor die soorten verontreiniging die de voltooide batch van het voedingssupplement ongeschikt voor de handel kunnen maken of daartoe kunnen leiden” vaststellen.5
Buiten geneesmiddelen zijn de microbiologische limieten op een extractspecificatie dus grotendeels een keuze, en de specificatie moet zeggen waarop ze zijn gebaseerd: een hoofdstuk en categorie van de farmacopee, een criterium uit het levensmiddelenrecht, of een getal dat door de leverancier of de koper is vastgesteld. Vraag welke. Vraag ook of ze passen bij het product dat u gaat maken, want de limieten voor een kruidengeneesmiddel in zijn eindvorm hangen af van de vorm en van de manier waarop het wordt ingenomen.1
Controleer: de norm waaraan elke limiet is ontleend en, bij een limiet uit een farmacopee, het hoofdstuk en de categorie.
05 / DE BEHANDELING
Hoe is het kiemgetal omlaag gebracht?
Een laag kiemgetal kan komen van schoon plantaardig materiaal en snel drogen, of van een behandeling die daarna is toegepast. Het reflectiedocument wil het eerste: verontreiniging moet bij voorkeur worden beperkt “door preventie in plaats van door gebruik van decontaminatiemethoden”, en een behandeling mag niet worden gebruikt “om een slechte microbiologische kwaliteit te verhullen”.1
Extractie is zelf een behandeling, tot op zekere hoogte. Het document schrijft ethanol van 60 tot 95% “duidelijke bactericide en fungicide effecten tegen vegetatieve vormen” toe. Zodra de alcohol is verdampt, kan het niveau echter weer stijgen, omdat het water dat in het concentraat achterblijft “microbiële groei kan vergemakkelijken”.1 Hitte en stoom behoren tot de andere methoden die het document beschrijft.
Twee behandelingen vragen om een eigen verklaring. De eerste is ethyleenoxidegas. Het gebruik ervan voor het decontamineren van kruidensubstanties, zo noteert het document, “is in de Europese Unie sinds 31 december 1989 verboden”.1 Een levensmiddelenrichtlijn uit 1999 stelt hetzelfde vast voor gedroogde aromatische kruiden, specerijen en plantaardige kruiderijen, waarvan de verontreiniging “niet langer kan worden behandeld met fumiganten zoals ethyleenoxide, wegens het potentieel giftige karakter van de residuen daarvan”.6
De tweede is doorstraling. Het document noemt doorstraling van kruidenpreparaten “niet aan te raden”.1 In het levensmiddelenrecht stelt dezelfde richtlijn van 1999 de eigen lijst van de Unie vast van levensmiddelen die met ioniserende straling mogen worden behandeld, en die lijst heeft één enkele vermelding: “Gedroogde aromatische kruiden, specerijen en plantaardige kruiderijen”.6 Zolang de lijst niet is voltooid, mogen de lidstaten vergunningen handhaven die al bestonden, onder voorwaarden van de kaderrichtlijn van dezelfde datum, Richtlijn 1999/2/EG.7 Waar een levensmiddel of een ingrediënt is doorstraald, geldt het volgende: “in alle gevallen dient de doorstraling te worden vermeld in de documenten die de doorstraalde levensmiddelen vergezellen of daarop betrekking hebben”.7
De meeste behandelingen maken niet ongedaan wat de micro-organismen al hebben achtergelaten: ze verlagen het aantal levende micro-organismen “maar verlagen de gehalten aan mycotoxinen of endotoxinen niet”. En waar een behandeling wordt gebruikt, vereist de monografie van de farmacopee over plantaardige drogen, zoals het document die citeert, bewijs “dat de bestanddelen van de plant niet worden aangetast en dat er geen schadelijke residuen achterblijven”.1
Controleer: of het plantaardige materiaal of het extract is behandeld om het kiemgetal te verlagen, met welke methode, en wat de documenten zeggen over doorstraling en ethyleenoxide.
06 / OPSLAG
Geldt het resultaat nog wanneer het extract bij u aankomt?
De microbiologische rijen behoren tot de rijen die na de test kunnen veranderen. Micro-organismen hebben water nodig om te groeien.1 Algemeen wordt erkend dat “in producten met een wateractiviteit onder 0.60 schimmels en gisten zich niet vermenigvuldigen”.8 De laagste wateractiviteit waarbij de overgrote meerderheid van de bacteriën groeit, is hoger, ongeveer 0.85, en volgens het document bedraagt de wateractiviteit van gedroogd plantaardig materiaal dat onder normale omstandigheden wordt bewaard, meestal 0.50 tot 0.60. Een poeder dat tijdens de opslag vocht opneemt, kan daarboven uitkomen: hygroscopische materialen, merkt het document op, “zijn meer geneigd microbiologische groei te ondersteunen”.1 Warmte vergroot het risico. Sommige micro-organismen, waaronder pathogenen voor de mens, groeien het best bij 30°C tot 40°C, vooral bij een hoge relatieve luchtvochtigheid.8
Lees deze rijen dus samen met de rij voor vocht of gewichtsverlies bij drogen, de verpakking en de bewaaromstandigheden. Een vochtgetal helpt het risico te beoordelen, maar zo’n test “kan een test op TAMC en TYMC niet vervangen”.1
Als u een levering opnieuw test, leg dan eerst drie dingen vast: de methode, de hoeveelheid en het aantal monsters, en de tijd. Voor de methode vragen Europese richtsnoeren om “procedures van de farmacopee (2.6.12, 2.6.31) of andere gevalideerde procedures”.2 Volgens de levensmiddelenverordening worden de analysemethoden die in de bijlage zijn vermeld, als referentie gebruikt.4 De hoeveelheid en het aantal monsters zijn die van de derde controle. Wat de tijd betreft: conventionele methoden zijn langzaam, want resultaten zijn niet beschikbaar “vóór een incubatieperiode van 5-14 dagen”.1
Of een resultaat op een certificaat aan die batch is gemeten, is een aparte vraag. Ons artikel over het analysecertificaat legt periodiek testen uit en wat een certificaat laat zien voor de batch die voorligt.
Controleer: de rij voor vocht of gewichtsverlies bij drogen, de verpakking en de bewaaromstandigheden en, voordat u opnieuw test, de methode, de geteste hoeveelheid en het aantal monsters.
WAT U MOET STUREN
Geef uw microbiologische limieten door bij uw aanvraag
Wanneer microbiologische limieten van belang zijn voor uw product, laat ons dan het volgende weten:
- het ingrediënt, en het plantendeel als er meer dan één wordt aangeboden;
- uw beoogde toepassing en bestemmingsmarkt;
- de limieten die uw kwaliteitsteam voor de twee kiemgetallen hanteert, en de norm waaraan ze zijn ontleend;
- de organismen die afwezig moeten zijn, en in welke hoeveelheid;
- of u microbiologische resultaten per batch nodig hebt;
- of u een verklaring nodig hebt over doorstraling of behandeling met ethyleenoxide;
- welke technische documenten u nodig hebt, zoals een specificatieblad of analysecertificaat;
- uw naam, bedrijf en contactgegevens.
Wij bieden technische documentatie en COA-ondersteuning, en de beschikbare set documenten wordt per ingrediënt en project bevestigd. Specificatiebereiken in onze catalogus zijn referenties, en haalbaarheid, beschikbaarheid en prijs worden bevestigd met uw offerte.
Dit artikel beschrijft gepubliceerde richtsnoeren en wetgeving en geeft geen microbiologische waarden voor ingrediënten van YOHOLIFE®; de specificatie en de documenten voor een gekozen kwaliteit worden bevestigd wanneer u een aanvraag doet. Bronnen 1, 2 en 8 zijn geschreven voor kruidengeneesmiddelen en worden hier aangehaald vanwege hun definities en aanpak. De Europese Farmacopee wordt beschreven zoals die bronnen haar beschrijven; raadpleeg de actuele uitgave voor de tekst en de limieten zelf. Bron 3 is een gepubliceerd onderzoek; bronnen 4, 6 en 7 betreffen het levensmiddelenrecht van de Europese Unie; bron 5 is Amerikaans recht. Groot-Brittannië heeft eigen versies van de aangehaalde levensmiddelenregels, die hier niet worden behandeld. De bronnen zijn gecontroleerd op 12 november 2026 en worden gegeven ter oriëntatie, niet als advies over regelgeving.
